黃曲黴(méi)毒(dú)素(sù)B1是(shì)自然界中毒(dú)性(xìng)和致(zhì)癌性較(jiào)強的(dí)真(zhēn)菌(jūn)毒(dú)素之一(yī),主(zhǔ)要(yào)汙染玉米,花生及(jí)其製品。對(duì)食品中的痕(hén)量(liáng)B1進行精準檢測,是保障(zhàng)食品安(ān)全的關鍵。

一,工作(zuò)原理:基(jī)於抗(kàng)原(yuán)抗體(tǐ)的特(tè)異性(xìng)捕獲(huò)
黃曲(qū)黴(méi)毒(dú)素B1免(miǎn)疫親和柱的核(hé)心是高(gāo)特異性的(dí)抗原抗體(tǐ)反(fǎn)應。柱內(nèi)填(tián)料(liào)的凝膠上(shàng)共(gòng)價鍵(jiàn)合(hé)著黃曲黴毒(dú)素(sù)B1的單克隆抗體。
當(dāng)經過(guò)提(tí)取(qǔ),稀釋的樣(yàng)品(pǐn)溶液緩慢通過柱子(zǐ)時,溶液中的(dí)黃(huáng)曲黴毒素B1分子(zǐ)會被柱(zhù)內(nèi)的(dí)抗體(tǐ)精準識別並牢牢(láo)結合,固定(dìng)在(zài)柱(zhù)子上(shàng)。
樣(yàng)品(pǐn)基(jī)質(zhì)中(zhōng)的油脂(zhī),蛋(dàn)白質,色素(sù)等其他幹(gān)擾(rǎo)物質,由於不與抗體結(jié)合(hé),會(huì)隨(suí)溶液直接(jiē)流出(chū)並被(bèi)棄去(qù),從而(ér)實現目(mù)標毒素與復(fù)雜基(jī)質的有(yǒu)效(xiào)分(fēn)離。
二,核心(xīn)步(bù)驟(zhòu):上樣,淋洗與洗脫的(dí)精密控(kòng)製
控製(zhì)流速(sù)是(shì)貫(guàn)穿全(quán)程的(dí)關鍵。上樣(yàng),淋(lín)洗(xǐ)和洗脫(tuō)步(bù)驟(zhòu)的(dí)流(liú)速(sù)均需嚴(yán)格控製(zhì),通常推(tuī)薦為(wéi)每秒1-2滴。流速(sù)過(guò)快會(huì)導致目(mù)標毒素(sù)未(wèi)能充(chōng)分(fēn)結合而流失,致使(shǐ)檢測(cè)結果偏(piān)低。
樣品(pǐn)溶(róng)液(yè)的pH值至(zhì)關重要,必須調節(jié)在(zài)6.0至8.0之間,以(yǐ)確(què)保抗體(tǐ)活(huó)性和最佳(jiā)的(dí)抗原結合效率。淋洗(xǐ)步(bù)驟(zhòu)通常(cháng)使用(yòng)PBS緩衝(chōng)液(yè)或純(chún)水(shuǐ),以(yǐ)去除非(fēi)特(tè)異性(xìng)吸附的(dí)雜質。
最後,使用(yòng)純甲醇作為洗脫(tuō)液(yè),將特異性結合在抗體(tǐ)上(shàng)的黃(huáng)曲(qū)黴毒素B1分子(zǐ)解離下來,收集(jí)洗脫液(yè)用(yòng)於(yú)後(hòu)續(xù)的儀器分析(xī)。
三(sān),使用前準備(bèi):溫(wēn)度(dù)管(guǎn)理(lǐ)與柱容量確(què)認
使(shǐ)用(yòng)前(qián),免疫親和(hé)柱需(xū)從2-8°C的(dí)冷藏條件中取出(chū),平(píng)衡(héng)至室(shì)溫(wēn)(22-25°C),以(yǐ)恢復最佳(jiā)結合活(huó)性(xìng)。親和(hé)柱(zhù)嚴(yán)禁(jīn)冷(lěng)凍儲(chǔ)存(cún)。
需注(zhù)意(yì)親(qīn)和(hé)柱的柱容量(liáng)。不同(tóng)品(pǐn)牌柱子(zǐ)的(dí)結合(hé)能力(lì)(如(rú)≥200ng)不同。若樣品(pǐn)中(zhōng)待測毒素含(hán)量(liáng)可(kě)能超(chāo)過柱(zhù)容量,應(yīng)減少(shǎo)上(shàng)樣(yàng)體(tǐ)積或(huò)稀釋(shì)樣(yàng)品(pǐn),防止(zhǐ)因過載導致毒(dú)素(sù)損(sǔn)失和結(jié)果(guǒ)失(shī)真。
四(sì),安全與維(wéi)護:嚴格防護與廢棄物處(chǔ)理(lǐ)
黃(huáng)曲黴毒(dú)素B1是(shì)劇毒強(qiáng)致癌物,操(cāo)作時必(bì)須(xū)佩戴手套(tào),口罩等防護(hù)用品(pǐn),並(bìng)在通風(fēng)良(liáng)好(hǎo)的環(huán)境(jìng)中(zhōng)進行(háng)。
所有接(jiē)觸過毒(dú)素的(dí)容器(qì),廢液及使用過(guò)的(dí)免(miǎn)疫親(qīn)和柱(zhù),必須進行(háng)嚴格(gé)的(dí)解毒處(chǔ)理(lǐ)。推薦使用(yòng)5%濃(nóng)度(dù)的次(cì)氯酸鈉(nà)溶(róng)液浸泡過(guò)夜,以破壞毒素結構(gòu)。切(qiē)勿(wù)使用(yòng)過有(yǒu)效(xiào)期(qī)的親和柱。
從花生(shēng),玉(yù)米(mǐ)到食用油,黃曲黴毒(dú)素B1免(miǎn)疫親和(hé)柱(zhù)如同(tóng)一(yī)位精準的“分(fēn)子捕手”,從(cóng)復雜的食(shí)品基質中純(chún)化出(chū)微(wēi)量的毒(dú)素。它連(lián)接了樣品(pǐn)前(qián)處理與(yǔ)精(jīng)密儀器分析,是(shì)確保檢測數(shù)據準確,可(kě)靠的基(jī)石。
正(zhèng)是(shì)這(zhè)種基於生物特(tè)異性的(dí)淨化技術,築(zhù)起(qǐ)了守護食品(pǐn)安(ān)全(quán)的第一道堅實防(fáng)綫(xiàn)。